| ■ 制品內(nèi)容 Plasmid pG-KJE8 (10 ng/μl)100 μl Plasmid pGro7 (10 ng/μl)100 μl Plasmid pKJE7 (10 ng/μl)100 μl Plasmid pG-Tf2 (10 ng/μl)100 μl Plasmid pTf16 (10 ng/μl)100 μl |
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| 【注意】本制品僅限用于科研目的，凡用于商業(yè)用途，須獲得Takara公司授權(quán)許可。了解詳細(xì)信息以及獲取相關(guān)許可文件，請致電4006518761或郵件聯(lián)絡(luò)service@takarabiomed.com.cn。 |
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| ■ 貯存溶液 Tris-HCl (pH 8.0)10 mM EDTA1 mM |
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| ■ 制品說明 |
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| 蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能分析是后基因組學(xué)領(lǐng)域面臨的挑戰(zhàn)之一，現(xiàn)已受到廣泛關(guān)注。表達(dá)的大量重組蛋白質(zhì)需要對其結(jié)構(gòu)和功能進(jìn)行測定，為了滿足這一需求，便開發(fā)了多種表達(dá)系統(tǒng)。大腸桿菌由于系統(tǒng)簡單，在表達(dá)系統(tǒng)的選擇上范圍廣泛，因此通常被用作蛋白質(zhì)表達(dá)的宿主菌。但是，外源蛋白質(zhì)在E.coli中表達(dá)時，常常出現(xiàn)表達(dá)的蛋白質(zhì)形成包涵體或被蛋白酶降解的情況，原因大多是表達(dá)的蛋白質(zhì)沒能進(jìn)行正確的折疊，這不利于研究蛋白質(zhì)功能。已證實，分子伴侶 (Molecular Chaperones) 或稱伴侶蛋白參與蛋白質(zhì)的折疊過程。為探究蛋白質(zhì)的體內(nèi)折疊機理，已投入了大量的研究工作。HSP Research Institute, Inc.在分子伴侶研究領(lǐng)域做出了顯著的貢獻(xiàn)。 本Chaperone Plasmid Set含有五種類型的質(zhì)粒，每一種質(zhì)粒都能有效表達(dá)不同類型的伴侶蛋白組，各伴侶蛋白組協(xié)同作用、共同參與蛋白質(zhì)折疊。據(jù)報道，目的蛋白質(zhì)與其中一種“Chaperone team”共同表達(dá)，便可增加可溶性蛋白質(zhì)的回收率，而使用通常方法，由于包涵體的形成，這些表達(dá)蛋白質(zhì)常常是不可回收的 (參見圖1)。圖1. 伴侶蛋白對胞內(nèi)蛋白質(zhì)合成體系的作用〈可使用大腸桿菌表達(dá)體系〉伴侶蛋白質(zhì)粒含有pACYC的復(fù)制起點和氯霉素抗性基因 (Cmr基因)，通常應(yīng)用在大腸桿菌表達(dá)體系中，與ColE1型、具有氨芐抗性 (Ampr) 篩選標(biāo)記的表達(dá)載體共存。各伴侶蛋白質(zhì)基因位于araB啟動子或Pzt-1 (tet) 啟動子下游，而目的基因處于lac或其它啟動子的控制之下，目的蛋白質(zhì)與伴侶蛋白可分別誘導(dǎo)表達(dá)。另外，質(zhì)粒上也具備啟動子必要的元件 (araC或tetR)。需注意的是該伴侶蛋白質(zhì)粒不可以與含有氯霉素抗性基因的表達(dá)質(zhì)粒共同使用。例如，常用的pET系列載體等可以使用E.coli BL21 (DE3) 作為宿主，卻不可以使用E.coli BL21 (DE3) pLysS和E.coli BL21 (DE3) pLysE，因為它們分別包含了帶有Cmr基因、pACYC復(fù)制起點的pLysS或pLysE質(zhì)粒。此外，可以考慮使用的宿主還有E.coli JM109。 質(zhì)粒伴侶蛋白啟動子誘導(dǎo)物抗性標(biāo)記 pG-KJE8 dnaK-dnaJ-grpEaraB L-ArabinoseCm groES-groELPzt-1 Tetracyclin pGro7 groES-groELaraB L-ArabinoseCm pKJE7 dnaK-dnaJ-grpEaraB L-ArabinoseCm pG-Tf2 groES-groEL-tigPzt-1 TetracyclinCm pTf16 tigaraB L-ArabinoseCm表1：各質(zhì)粒編碼的伴侶蛋白質(zhì)種類及誘導(dǎo)物 ■ 保存-20℃。 ■ Chaperone Plasmid載體圖譜 |
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